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荧光原位杂交技术原理及应用

原位杂交(in situ hybridization,ISH)指将目标DNA或RNA序列通过放射性或非放射性物标记后与染色体DNA进行杂交检测目标序列在染色体上的位置与分布特征的技术。荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization,FISH)指用荧光标记物代替放射性同位素标记探针而进行的原位杂交。本文概述荧光原位杂交技术原理、标记物的选择、技术要点、发展及...

蓝白斑筛选步骤与原理,蓝白斑实验失败的原因

蓝白斑筛选是重组子筛选的1种方法,是在抗生素筛选基础上的第2次筛选,是根据载体的遗传特征筛选重组子。在这种方法中,片段被克隆进多克隆位点内(MCS),而MCS区位于基因lacΖα内部,也就是说成功克隆的载体,其lacΖα基因是破坏了的。本文介绍蓝白斑筛选步骤与原理、及分析实验失败原因。蓝白斑筛选实验原理蓝白斑筛选是一种快速有效的重组细菌鉴定技术,依赖于β-半乳糖苷酶的活性。β-半乳糖苷酶是一...

质粒载体,质粒载体人工改造

质粒(Plasmid)是一类天然存在于细菌和真菌细胞中能独立于染色体DNA而自主复制的共价、闭合、环状双链DNA分子,也称为ccDNA,其大小通常在1~600 kb内。载体(vector)一类能自我复制的DNA分子,其中的一段DNA被切除而不影响其复制,可用以置换或插入外源(目的) DNA而将目的DNA带入宿主细胞。常用的载体有质粒、噬菌体、病毒等。质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操...